Основные положения

Болезнь Лайма и анаплазмоз — это клещевые инфекции, которые могут иметь серьезные долгосрочные последствия при отсутствии своевременного лечения.
Двухэтапное тестирование включает скрининг с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) и подтверждение результатов методом иммуноблоттинга, что позволяет снизить количество ложноположительных результатов.
Чувствительность тестов на болезнь Лайма составляет всего 20–50% при ранней локализованной инфекции, поэтому может потребоваться повторное тестирование через 2–3 недели.
При подозрении на нейроборрелиоз анализ ликвора с расчетом антителного индекса позволяет подтвердить внутрицентральное выработку антител.
Тесты, использующие рекомбинантные антигены, обеспечивают более высокую диагностическую уверенность: несколько методов показывают чувствительность и специфичность выше 95%.

Болезнь Лайма и анаплазмоз — это две клещевые инфекции, которые могут вызывать серьезные долгосрочные проблемы со здоровьем при отсутствии своевременной диагностики и лечения. В этой статье объясняется, как современные лабораторные тесты с использованием иммуноферментного анализа (ИФА), иммуноблоттинга и технологии Microblot-Array помогают врачам выявлять эти инфекции с высокой точностью. Недавние диагностические тесты позволяют выявлять болезнь Лайма с чувствительностью и специфичностью 95–99%, что означает правильную идентификацию как наличия, так и отсутствия инфекции в подавляющем большинстве случаев.

Введение: две клещевые инфекции
Стадии боррелиоза Лайма
Человеческий гранулоцитарный анаплазмоз (ЧГА)
Как врачи диагностируют эти инфекции
Чувствительность тестов на разных стадиях заболевания
Научная основа тестов: ключевые антигены
Объяснение иммуноферментного анализа (ИФА)
Объяснение иммуноблоттинга (вестерн-блота)
Автоматизированное тестирование с помощью BlueBLOT-LINE
Microblot-Array: передовая мультиплексная технология
Нейроборрелиоз и антителный индекс
Клинические последствия для пациентов
Ограничения и важные замечания
Рекомендации для пациентов
Информация об источнике

Введение: Два клещевых инфекционных заболевания

Лайм-боррелиоз (часто называемый болезнью Лайма) — это системное инфекционное заболевание, вызываемое спиралевидными бактериями Borrelia burgdorferi (представителями спирохет). Инфекция передается человеку через укус клещей рода Ixodes — тех же оленьих клещей, которые распространены во многих регионах мира.

Болезнь Лайма характеризуется как ранними, так и поздними клиническими симптомами, которые могут затрагивать практически любую систему организма. Человеческий гранулоцитарный анаплазмоз (ЧГА) — это отдельное заболевание, вызываемое другой бактерией — Anaplasma phagocytophilum. Во многих регионах переносчиком обоих заболеваний служит иксодовый клещ Ixodes ricinus. Пока клещ питается кровью, бактерии проникают в сердечно-сосудистую систему хозяина, где поражают клетки крови.

Эти инфекции представляют важность для пациентов, поскольку их часто пропускают или ставят ошибочный диагноз. Симптомы могут имитировать многие другие состояния, а тестирование на антитела не всегда является однозначным. Понимание принципов работы тестов поможет вам задать правильные вопросы, если вы или ваш близкий проходит обследование на наличие клещевой инфекции.

Стадии лайм-боррелиоза

Болезнь Лайма протекает в трех различных стадиях, каждая из которых имеет свой набор симптомов и диагностических трудностей.

Ранняя локализованная инфекция (от дней до недель)

Эта первая стадия характеризуется мигрирующей эритемой (ME) — классической сыпью в виде «бычьего глаза». Важно отметить, что эта сыпь появляется только у 50% пациентов. Ранние симптомы также могут включать «гриппоподобные» проявления, головную боль и увеличение лимфатических узлов (лимфаденит). Это означает, что половина всех инфицированных пациентов может не иметь характерной сыпи, которую большинство людей ассоциирует с болезнью Лайма.

Ранняя диссеминированная инфекция (от недель до месяцев)

В течение этой стадии бактерии Borrelia распространяются по кровеносным сосудам и лимфатической системе, достигая центральной нервной системы (ЦНС), суставов, сердца, глаз, кожи и других органов. Наиболее часто диагностируемыми симптомами на этом этапе являются:

Нейроборрелиоз — поражение нервной системы
Парез лицевого нерва — паралич лицевого нерва (синдром Белла)
Боррелиозная лимфоцитома — сине-красные уплотнения, часто на мочках ушей или костяшках пальцев
Синдром Баннварта — сочетание невралгической боли, менингита и паралича лицевого нерва

Дополнительные симптомы могут включать изменения кожи (примерно в 20% случаев) и неспецифические проявления, напоминающие многие другие заболевания: увеличение лимфоузлов, головные боли, мышечные боли, тошнота, рвота, проблемы с желудком и частые парезы (мышечная слабость или частичный паралич).

Поздняя диссеминированная инфекция (от месяцев до лет)

Без эффективного лечения заболевание может перейти в позднюю стадию, которая длится месяцами или даже годами. Наиболее типичными иммунными изменениями, диагностируемыми на этом этапе, являются:

Хронический атрофический акродерматит (ХАА) — хронические кожные поражения, которые могут вызывать истончение кожи и изменение её цвета
Хронический нейроборрелиоз — стойкое поражение нервной системы
Боррелиозный артрит — воспаление суставов, часто коленных

Масштабные исследования показали, что различные геноспеции (подтипы) Borrelia связаны с разными клиническими проявлениями. B. garinii ассоциируется с неврологическими симптомами, B. afzelii — с хроническими кожными заболеваниями (особенно с ХАА), а B. burgdorferi sensu stricto в основном связана с поражением суставов. Однако все геноспеции могут вызывать мигрирующую эритему и многие другие клинические проявления.

Человеческий гранулоцитарный анаплазмоз (ЧГА)

Анаплазмоз — острое заболевание, которое обычно развивается в течение одной недели после укуса клеща. Симптомы могут варьироваться от полностью бессимптомных форм до тяжелых, угрожающих жизни состояний с респираторными, желудочно-кишечными, почечными и неврологическими проявлениями.

Первым и наиболее распространенным признаком является лихорадочное состояние, длящееся не менее 3–7 дней после укуса клеща. Тяжелые осложнения более вероятны у пациентов с ослабленной иммунной системой (иммунодефицит), лиц, перенесших трансплантацию органов, и пациентов без селезенки. Заболевание обычно протекает остро; однако в более сложных случаях, если лечение не начато своевременно, оно может стать хроническим и даже угрожать жизни.

Одним из заметных эпидемиологических факторов является то, что мужчины болеют анаплазмозом в четыре раза чаще, чем женщины (соотношение 4:1).

Диагностика ЧГА только на основе клинических симптомов крайне затруднительна, поэтому лабораторные данные имеют решающее значение. Характерные лабораторные находки включают:

Лейкопения — низкий уровень лейкоцитов
Тромбоцитопения — низкий уровень тромбоцитов
Повышение уровня печеночных трансаминаз — признаки поражения печени по результатам анализов крови

Выработка антител начинается в течение первых 2 недель после начала заболевания. Однако только 30–60% пациентов дают положительный результат (серопозитивны) в острой фазе. Этот показатель возрастает до 70–90% в период выздоровления, что имеет важное значение для определения времени проведения тестирования.

Ведущие врачи о том, почему мнение эксперта имеет значение

Короткие фрагменты бесед с экспертами о втором мнении, точном выборе специалиста и о том, как избежать распространенных медицинских ошибок.

01 / 11

Знания важнее опыта

Ведущий онкохирург о том, почему узкоспециализированные знания могут быть важнее стажа или общего опыта.

Как врачи диагностируют эти инфекции

Диагноз болезни Лайма и анаплазмоза ставится на основе трех компонентов: истории болезни пациента (анамнез), клинической картины (симптомы и объективные данные осмотра) и результатов лабораторных тестов. В настоящее время методами выбора являются скрининг специфических антител IgG и IgM с помощью иммуноферментного анализа, за которым следует подтверждение наличия антител к специфическим антигенам методом иммуноблоттинга (вестерн-блота). Прямое культивирование бактерий или электронная микроскопия непрактичны для рутинного использования.

Серологическая диагностика боррелиоза затруднена по нескольким причинам:

Высокое генетическое разнообразие вида Borrelia burgdorferi sensu lato
Возможная перекрестная реактивность с неродственными антигенами других микроорганизмов
Богатое содержание боррелиями белков теплового шока, которые могут вызывать неспецифические иммунные реакции
Высокая вариабельность индивидуальной серологической реактивности
Чрезвычайно медленное выработка антител на ранней стадии заболевания
Антитела IgG и IgM могут сохраняться более десяти лет, что затрудняет различение прошлой инфекции и активной

Двухуровневый подход к тестированию

Для максимизации точности врачи используют двухуровневую стратегию обнаружения антител. Этот подход одобрен европейскими и американскими руководствами (как обобщено Eldin et al., 2019).

Уровень 1 (скрининг): Образцы тестируются методом ИФА, который разделяет пациентов на группы с положительным или отрицательным статусом по антителам.
Уровень 2 (подтверждение): Положительные и пограничные результаты подтверждаются с помощью иммуноблоттинга, который обнаруживает антитела к специфическим антигенам Borrelia.

Если первый тест отрицательный, но симптомы пациента сохраняются, следует взять вторую (контрольную) пробу крови через 2–3 недели и провести повторное тестирование. Это важно, потому что уровень антител может быть неопределяемым на самых ранних стадиях инфекции.

Количество расхождений между результатами иммуноблоттинга (уровень 2) и ИФА (уровень 1) снижается, когда метод ИФА основан на рекомбинантных антигенах, как это имеет место в тестах TestLine, описанных в этой статье.

Результат теста сам по себе не ставит диагноз — он его подтверждает. Окончательный диагноз основывается на комплексной клинической картине пациента, а не только на серологическом результате.

Чувствительность теста на разных стадиях заболевания

Один из самых важных фактов, которые пациенты должны понимать: чувствительность этих тестов — их способность обнаруживать заболевание при его наличии — значительно варьируется в зависимости от стадии болезни. Согласно немецким стандартам качества MiQ, диагностическая чувствительность для различных форм боррелиоза Лайма составляет:

Локализованная ранняя инфекция (мигрирующая эритема, боррелиозная лимфоцитома, множественная МЭ): 20–50%
Диссеминированная ранняя инфекция (нейроборрелиоз, лайм-артрит, кардит): 70–90%
Диссеминированная поздняя инфекция (хронический атрофический акродерматит, поздний нейроборрелиоз): 90–100%

Другими словами, отрицательный результат теста на ранней стадии заболевания не исключает болезнь Лайма. Именно поэтому повторное тестирование через 2–3 недели так важно при сохранении симптомов.

Наука за тестами: ключевые антигены

Современные диагностические тесты ищут не любые антитела, а антитела к специфическим белкам (антигенам) бактерии. Каждый антиген появляется в разное время во время инфекции и связан с различными клиническими проявлениями. Вот ключевые антигены Borrelia, используемые в этих тестах:

VlsE (Ba, Bg, Bs) — основной антиген раннего и позднего антителного ответа. Он значительно повышает чувствительность теста; примерно 90% положительных сывороток и образцов спинномозговой жидкости реагируют на эту полосу антигена.
p83 — основной внеклеточный белок, антиген позднего антителного ответа, высоко характерный для нейроборрелиоза.
p58 (OppA-2) — мембранный транспортер, считающийся маркером диссеминированной стадии болезни Лайма.
p41 (Ba, Bs)—внутренняя часть флагеллина, высокоспецифичный антиген раннего антителоответа.
p39 (BmpA)—рецептор гликозаминопептида и антиген поздней стадии ответа. Имеет значение при распространенной болезни Лайма на поздних стадиях и часто ассоциируется с лайм-артритом.
OspA (Ba, Bg, Bs)—наружный поверхностный белок A, антиген поздней стадии ответа, характерный для нейроборрелиоза.
OspB—наружный поверхностный белок B, антиген поздней стадии ответа.
OspC (Ba, Bg, Bs, Bsp)—наружный поверхностный белок C, иммунодоминантный маркер антителоответа IgM (самые ранние вырабатываемые антитела).
OspE—наружный поверхностный белок E.
NapA—белок A, активирующий нейтрофилы, сильный иммуноген и основной маркер патогенеза лайм-артрита.
p17 (DbpA)—белок A, связывающий декорин, участвует как в раннем, так и в позднем антителоответе и характерен для нейроборрелиоза.

Буквы Ba, Bg, Bs и Bsp обозначают конкретные подвиды бактерий, от которых получен антиген: B. afzelii, B. garinii, B. burgdorferi sensu stricto и B. spielmanii.

Anaplasma и перекрестно реагирующие антигены

Для анаплазмоза ключевыми антигенами являются p44 (основной антиген антителоответа на ГГА), OmpA (белок наружной мембраны и значимый маркер вирулентности) и Asp62 (поверхностный белок мембранного транспортера).

В тесты также включены антигены для выявления перекрестных реакций с другими инфекциями: TpN17, высокоспецифичный мембранный белок Treponema pallidum (бактерии, вызывающей сифилис), и VCA-p18, вирусный капсидный антиген, выявляющий инфекцию ЭБВ (вирусом Эпштейна-Барр). Включение этих антигенов помогает предотвратить ложноположительные результаты, вызванные антителами к несвязанным инфекциям.

Объяснение тестирования методом ИФА

ИФА (иммуноферментный анализ) — это скрининговый тест первого уровня. Тесты EIA от TestLine основаны на сэндвич-методе ИФА. Они предназначены для выявления антител IgG и IgM в сыворотке крови, плазме, спинномозговой или синовиальной (суставной) жидкости человека.

Обзор протокола, понятный пациентам

Процесс тестирования прост и занимает около 1,5 часов в целом:

Пробы разводят: сыворотку/плазму в соотношении 1:101 (10 мкл + 1 мл), спинномозговую жидкость в соотношении 1:2 (110 мкл + 110 мкл) или синовиальную жидкость в соотношении 1:21 или 1:41.
Контрольные образцы и разведенные пробы пипетируют в лунки микропланшета (по 100 мкл в каждую).
Планшет инкубируют в течение 30 минут при температуре 37°C.
Жидкость из лунок аспирируют и промывают 4 раза.
Добавляется конъюгат (детектирующий антитело) (100 мкл), после чего следует еще одна инкубация в течение 30 минут при температуре 37°C.
Лунки промываются 5 раз.
Добавляется субстратный раствор (TMB-Complete) (100 мкл), и проводится инкубация в течение 15 минут при температуре 37°C.
Добавляется стоп-раствор, и интенсивность окраски измеряется при длине волны 450 нм.

Результаты оцениваются полуколичественно с использованием Индекса позитивности (IP), который сравнивает образец пациента с контрольным пороговым значением, входящим в комплект. Наборы поставляются с готовыми к использованию компонентами, обозначенными цветовым кодом, и разделяющимися полосками микропланшетов, что делает их удобными для лабораторий.

Производительность ИФА: что означают цифры

Диагностическая эффективность этих тестов весьма высока. Для пациентов это означает, что можно доверять подтвержденному результату. Ключевыми показателями являются чувствительность (способность правильно выявлять тех, кто болен) и специфичность (способность правильно выявлять тех, кто здоров):

EIA Borrelia recombinant IgG: чувствительность 98,3%, специфичность 98,1%
EIA Borrelia recombinant IgM: чувствительность 99,1%, специфичность 97,3%
EIA Borrelia afzelii VlsE IgG: чувствительность 98,9%, специфичность 98,9%
EIA Borrelia afzelii IgM: чувствительность 95,6%, специфичность 99,0%
EIA Borrelia b. sensu stricto VlsE IgG: чувствительность 98,9%, специфичность 98,9%
EIA Borrelia b. sensu stricto IgM: чувствительность 97,5%, специфичность 98,9%
EIA Borrelia garinii VlsE IgG: чувствительность 98,9%, специфичность 99,0%
EIA Borrelia garinii IgM: чувствительность 95,7%, специфичность 98,9%

Эти наборы используют рекомбинантные (генно-инженерные) антигены конкретных видов Borrelia, включая VlsE (Ba, Bg, Bs), p83, p58, p41 (внутренний флагеллин), p39, OspA, OspB, OspC, OspE, p17 и NapA. Также доступны версии с цельноклеточными антигенами, обогащенные VlsE, для каждого основного геновида.

Почему важны рекомбинантные антигены: исследование антителного ответа

Исследования показывают, что тесты с рекомбинантными антигенами выявляют антителный ответ с более высокой динамикой (то есть дают более четкие положительные результаты), чем тесты с цельноклеточными антигенами. В исследовании 86 пациентов с нейроборрелиозом индекс позитивности был последовательно выше при использовании ИФА с рекомбинантными антигенами (как для IgG, так и для IgM) по сравнению с ИФА с цельноклеточными антигенами. Это означает меньшее количество сомнительных результатов и большую диагностическую уверенность.

Объяснение тестирования иммуноблоттингом (вестерн-блот)

Иммуноблоттинг, широко известный как вестерн-блот, является тестом подтверждения второго уровня. Он работает за счет разделения специфических бактериальных белков и их фиксации на полоске нитроцеллюлозной мембраны. Если в крови пациента присутствуют антитела к этим белкам, они связываются с полоской и образуют видимые окрашенные полосы, напоминающие штрих-код. Это позволяет врачам точно определить, к каким бактериальным белкам реагирует иммунная система.

Что пациенту следует знать о процедуре

Образцы разводят: сыворотка/плазма в соотношении 1:51 (30 мкл + 1,5 мл), ликвор — 1:2 или синовиальная жидкость — 1:17,5.
Полоски выдерживают в универсальном растворе в течение 10 минут.
Добавляют разведенные образцы и инкубируют в течение 30 минут на шейкере.
Полоски промывают 3 раза по 5 минут.
Добавляют конъюгат и инкубируют в течение 30 минут.
Полоски снова промывают, затем добавляют субстратный раствор (BCIP/NBT) на 15 минут.
После финальной промывки полоски высушивают и оценивают результаты.

Каждая полоска содержит контрольную линию для подтверждения корректности проведения теста. Преимущества иммуноблоттинга включают простоту интерпретации, высокую воспроизводимость и возможность обнаружения антител в ликворе. Серия BLOT-LINE включает отдельные наборы для B. afzelii, B. garinii, B. burgdorferi sensu stricto, комбинированного тестирования Borrelia/HGA, а также отдельные наборы для определения IgG и IgM к Anaplasma.

Данные о характеристиках иммуноблоттинга

BLOT-LINE Anaplasma IgG: чувствительность 92,0%, специфичность 94,0%
BLOT-LINE Anaplasma IgM: чувствительность 91,4%, специфичность 99,0%
BLOT-LINE Borrelia/HGA IgG: чувствительность 96,8%, специфичность 98,5% (для Borrelia); чувствительность 92,9%, специфичность 96,3% (для Anaplasma)
BLOT-LINE Borrelia/HGA IgM: чувствительность 97,1%, специфичность 96,4% (для Borrelia); чувствительность 94,7%, специфичность 97,1% (для Anaplasma)
BLOT-LINE Borrelia afzelii IgG: чувствительность 97,3%, специфичность 96,9%
BLOT-LINE Borrelia afzelii IgM: чувствительность 96,6%, специфичность 95,9%
BLOT-LINE Borrelia garinii IgG: чувствительность 97,1%, специфичность 96,2%
BLOT-LINE Borrelia garinii IgM: чувствительность 95,2%, специфичность 97,0%
BLOT-LINE Borrelia b. sensu stricto IgG: чувствительность 96,8%, специфичность 96,9%
BLOT-LINE Borrelia b. sensu stricto IgM: чувствительность 96,2%, специфичность 96,8%

Какой тест на виды Borrelia наиболее эффективен при нейроборрелиозе?

В исследовании 60 пациентов с нейроборрелиозом сравнивалась реактивность трех видовоспецифичных наборов BLOT-LINE. Набор BLOT-LINE Borrelia garinii показал более чем на 20% более высокую реактивность в этой группе пациентов по сравнению с наборами для B. afzelii и B. burgdorferi sensu stricto, как для IgM, так и для IgG. Это объясняется тем, что именно B. garinii наиболее часто ассоциируется с неврологическими симптомами. В отдельном исследовании 87 пациентов с нейроборрелиозом антитела к VlsE (ключевому диагностическому антигену) были обнаружены примерно в 80% образцов сыворотки крови и 70% образцах ликвора. У пациентов, у которых нейроборрелиоз был исключен, а также у здоровых контрольных лиц (n=68), эти показатели были значительно ниже. Если у вас есть неврологические симптомы, ваш врач может специально назначить иммуноблоттинг для B. garinii из-за его более высокой чувствительности при данной форме заболевания.

Автоматизированное тестирование с помощью BlueBLOT-LINE

Для лабораторий с высокой пропускной способностью прибор BlueDiver в сочетании с наборами BlueBLOT-LINE Borrelia предлагает полностью автоматизированное решение. Эта система автоматически контролирует партии и сроки годности путем считывания штрих-кодов, выполняет пипетирование, инкубацию и промывку, что снижает риск человеческой ошибки.

Общее время анализа составляет 1 час 14 минут: 30 минут инкубации с образцом, 20 минут с конъюгатом и 10 минут с субстратом, между которыми выполняются автоматические этапы промывки.

Полоски BlueBLOT-LINE включают контрольные линии реактивности и отдельные контроли конъюгата для IgG и IgM, а также широкий спектр антигенов: VlsE (Ba, Bg, Bs), p83, p58, p41, p39, OspB, OspA, OspC, p17, NapA, p44, OmpA, TpN17 и EBV p18. Данные о характеристиках показывают:

BlueBLOT-LINE Borrelia IgG: чувствительность 97,4%, специфичность 99,0% (для Borrelia); чувствительность 83,0%, специфичность 99,0% (для Anaplasma)
BlueBLOT-LINE Borrelia IgM: чувствительность 98,3%, специфичность 99,0% (для Borrelia); чувствительность 92,0%, специфичность 96,0% (для Anaplasma)

Microblot-Array: передовая мультиплексная технология

Microblot-Array представляет собой новейшее поколение тестов для подтверждения диагноза. Специфичные рекомбинантные белки наносятся в виде крошечных точек на нитроцеллюлозную мембрану, которая помещается в лунку стандартной микропланшеты. Такая конструкция позволяет проводить анализ с использованием стандартного оборудования для иммуноферментного анализа (ИФА), одновременно тестируя несколько инфекций сразу (мультиплексная технология).

Одним из ключевых преимуществ для пациента является низкое потребление образца — требуется лишь совсем небольшое количество крови или жидкости. Антигены наносятся в трехкратном повторе для минимизации статистической вариабельности, а каждая лунка содержит контрольные точки, тестовые контроли, контроли конъюгата (отдельные для IgG и IgM) и четыре калибровочные точки для обеспечения достоверности результатов.

Данные о характеристиках Microblot-Array

Этот тест был валидирован на образцах сыворотки крови человека со следующими результатами:

Borrelia IgG: чувствительность 98,7% (n=74), специфичность 98,9% (n=100)
Borrelia IgM: чувствительность 98,5% (n=56), специфичность 99,9% (n=95)
Anaplasma IgG: чувствительность 92,0% (n=25), специфичность 99,9% (n=30)
Anaplasma IgM: чувствительность 95,0% (n=20), специфичность 99,9% (n=38)
Treponema IgG: чувствительность 98,3% (n=59), специфичность 99,9% (n=30)
EBV IgM: чувствительность 99,9% (n=39), специфичность 99,9% (n=51)

Сравнительные исследования показали, что результаты Microblot-Array совпадают с результатами стандартного ИФА в 92,2% случаев для IgG и 90,7% для IgM. При сравнении конкретно с ИФА на рекомбинантных антигенах и методом иммуноблоттинга (вестерн-блота) совпадение составило 92% и 90% соответственно. Небольшой процент несовпадений (8–10%) подчеркивает важность клинической корреляции: ни один тест не является идеальным, и решение врача имеет решающее значение.

Нейроборрелиоз и индекс антител

Для пациентов с подозрением на поражение нервной системы (нейроборрелиоз) критически важно специальное вычисление, называемое индексом антител (AI). Согласно международной рекомендации Согласованного действия Европейского союза по боррелиозу Лайма (EUCALB), для диагностики раннего и позднего нейроборрелиоза необходимо наличие доказательств внутриутерического синтеза антител. Простыми словами, это означает, что врачи должны доказать, что антитела вырабатываются внутри спинномозговой жидкости, а не просто присутствуют в крови.

Уровень антител в ликворе (спинномозговой жидкости) зависит от трех факторов:

Наличие антител в сыворотке крови (которые могут проникать в ликвор)
Проницаемость гематоэнцефалического барьера
Фактический внутриутерический синтез антител (в спинномозговой жидкости)

Само по себе наличие специфических антител — как в сыворотке, так и в ликворе — не является достаточным доказательством нейроборрелиоза. Расчет индекса антител (AI) сравнивает соотношение специфических антител в ликворе и сыворотке относительно состояния гематоэнцефалического барьера и общего уровня иммуноглобулинов. Этот тест можно провести на небольшом образце ликвора объемом около 0,15 мл, а специальное программное обеспечение для расчета индекса антител выполняет вычисления автоматически.

Таблица интерпретации является простой:

Сыворотка отрицательная, ликвор положительный: Подтвержден внутриутерический синтез — результат признан положительным (рекомендация EUCALB).
Сыворотка положительная, ликвор положительный: Обычно положительный результат, но возможна пассивная передача антител через нарушенный гематоэнцефалический барьер — необходимо определение индекса антител (AI).
Сыворотка положительная, ликвор отрицательный: Возможно положительный результат, если измеренные значения оптической плотности в ликворе и сыворотке близки к контрольному порогу — необходимо определение индекса антител (AI).
Сыворотка отрицательная, ликвор отрицательный: Отрицательный результат.

Точность расчетов индекса антител регулярно проверяется путем участия в программах внешней оценки качества, включающих более 200 лабораторий, организованных независимым научным обществом Instand e.V. Результаты TestLine по определению индекса антител стабильно демонстрируют высокие показатели в этих программах.

Клинические последствия для пациентов

Что означает вся эта техническая информация для вас как для пациента? Из данных следуют несколько практических выводов:

Во-первых, имеет значение время. Если вас укусил клещ и появились симптомы, слишком раннее тестирование может дать ложноотрицательный результат. Чувствительность иммуноферментного анализа для раннего локализованного боррелиоза Лайма составляет всего 20–50%. Если ваш тест отрицательный, но симптомы сохраняются, крайне важно пройти повторное тестирование через 2–3 недели. Аналогичным образом, антитела к анаплазме обнаруживаются только у 30–60% пациентов в острой фазе, повышаясь до 70–90% в период выздоровления.

Во-вторых, двухэтапная стратегия тестирования защищает вас. Комбинация скрининга с помощью иммуноферментного анализа и подтверждения с помощью иммуноблоттинга значительно снижает количество ложноположительных результатов. Тесты со специфичностью выше 97% означают, что менее чем у 3 из 100 здоровых людей будет ошибочно выявлена инфекция, а подтверждающее тестирование выявляет большинство таких случаев.

В-третьих, имеет значение тип теста. Тесты, использующие рекомбинантные антигены (генетически сконструированные специфические белки), демонстрируют более высокую динамику иммунного ответа по сравнению с тестами на цельноклеточные антигены. Это означает, что они дают более четкие положительные/отрицательные результаты с меньшим количеством неоднозначных пограничных значений, особенно у пациентов с нейроборрелиозом. Если у вас есть неврологические симптомы, тест, специфичный для B. garinii, может быть значительно более информативным — он показал более чем на 20% более высокую реактивность у пациентов с нейроборрелиозом по сравнению с тестами для других видов Borrelia.

В-четвертых, тестирование ликвора добавляет ценность при неврологических симптомах. Если ваш врач подозревает, что инфекция достигла вашей нервной системы, тестирование как крови, так и спинномозговой жидкости и расчет индекса антител могут показать, вырабатываются ли антитела внутри спинномозговой жидкости, что необходимо для диагностики нейроборрелиоза.

Ограничения и важные соображения

Ни один диагностический тест не является идеальным, и важно понимать ограничения серологического тестирования на клещевые инфекции:

Ложноотрицательные результаты на ранних стадиях заболевания: иммунной системе требуется время для выработки обнаруживаемых антител. При ранней болезни Лайма чувствительность может составлять всего 20–50%.
Сохранение антител: антитела IgG и IgM могут сохраняться более десяти лет после инфекции. Положительный результат теста не обязательно означает наличие активной инфекции, требующей лечения, — он может отражать перенесенную в прошлом инфекцию.
Перекрестная реактивность: антитела к другим микроорганизмам (например, к Treponema pallidum, возбудителю сифилиса, или вирусу Эпштейна-Барр) иногда могут вызывать ложноположительные результаты. Именно поэтому в тесты включают специфические антигены для выявления и исключения таких перекрестных реакций.
Индивидуальные различия: разные люди вырабатывают антитела с разной скоростью и интенсивностью. У некоторых пациентов могут быть пограничные результаты, требующие повторного тестирования.
Тест поддерживает, но не ставит диагноз самостоятельно: клиническая картина — ваши симптомы, данные физического осмотра и история контактов с переносчиками инфекции — всегда является основой для постановки диагноза. Результаты серологических исследований должны интерпретироваться в этом контексте.
Тяжелые осложнения у пациентов из групп риска: пациенты со сниженным иммунитетом, реципиенты трансплантатов и лица без селезенки находятся в группе более высокого риска развития тяжелой анаплазмоза и должны promptly обратиться за медицинской помощью после укуса клеща.

Часто задаваемые вопросы

Что представляет собой двухуровневая стратегия тестирования на болезнь Лайма и почему она применяется?

Врачи сначала проводят скрининг вашей крови с помощью теста ИФА. Если результат положительный или пограничный, выполняется второй подтверждающий тест — иммуноблоттинг. Этот двухуровневый подход рекомендован европейскими и американскими руководствами. Он снижает количество ложноположительных результатов и дает более точные данные, чтобы вы могли доверять подтвержденному результату.

Мой тест на болезнь Лайма дал отрицательный результат, но симптомы сохраняются. Что мне делать?

Если ваш первый тест отрицательный, а симптомы сохраняются, обсудите с врачом возможность повторного анализа крови через 2–3 недели. Антитела вырабатываются не сразу, и чувствительность теста на ранних стадиях может составлять всего 20–50%. Один ранний отрицательный результат не исключает болезнь Лайма.

Почему врач может назначить анализ ликвора (спинномозговой жидкости) при неврологических симптомах?

Если врач подозревает нейроборрелиоз, анализ ликвора позволяет выявить выработку антител непосредственно в спинномозговой жидкости. Специальный расчет — индекс антител (AI) — помогает подтвердить, что антитела вырабатываются локально. Это может стать убедительным доказательством активной инфекции нервной системы, даже если результаты анализов крови неоднозначны.

Какие основные различия между болезнью Лайма и анаплазмозом?

Болезнь Лайма вызывается бактериями Borrelia и может сопровождаться сыпью, болями в суставах и неврологическими нарушениями. Анаплазмоз вызывается бактериями Anaplasma и обычно начинается с лихорадки в течение недели после укуса клеща. Оба заболевания передаются одними и теми же клещами и могут быть серьезными при отсутствии лечения. Лабораторные тесты помогают различить их.

Насколько точны современные тесты на болезнь Лайма?

Современные иммуноферментные анализы (ИФА) имеют чувствительность и специфичность более 95% для большинства тестов, специфичных для болезни Лайма. Например, тест на рекомбинантный IgG к Borrelia обладает чувствительностью 98,3% и специфичностью 98,1%. Тесты иммуноблоттинга также демонстрируют высокую точность: чувствительность составляет около 96–98% для Borrelia. Однако ранняя инфекция все еще может быть пропущена, поэтому важно правильное время проведения теста.

Что означает положительный результат теста на болезнь Лайма, если заражение произошло много лет назад?

Антитела могут сохраняться в организме более десяти лет после инфекции. Положительный результат не обязательно означает наличие активной инфекции, требующей лечения. Врач интерпретирует результат вместе с учетом ваших симптомов, данных физического осмотра и истории контактов с переносчиками, чтобы решить, нужно ли лечение.

Мой тест на болезнь Лайма дал отрицательный результат, но симптомы сохраняются. Стоит ли получить второе мнение?

Да, второе мнение может быть полезным, если ваш тест на болезнь Лайма отрицательный, а симптомы сохраняются. Чувствительность тестов на раннюю стадию болезни Лайма составляет всего 20–50%, поэтому отрицательный результат не исключает инфекции. Часто требуется повторное тестирование через 2–3 недели. Второе мнение поможет обеспечить правильное проведение обследований, таких как подтверждение методом иммуноблоттинга или анализ ликвора при неврологических симптомах. Diagnostic Detectives Network предоставляет независимые экспертные вторые мнения.

Информация об источнике

Original Article Title: INFECTIOUS SEROLOGY – BACTERIOLOGY – BORRELIA | ANAPLASMA

Content Source: This article is based on technical documentation from TestLine Clinical Diagnostics regarding their ELISA, Immunoblot, and Microblot-Array diagnostic kits for Borrelia burgdorferi and Anaplasma phagocytophilum. Data presented include the manufacturer's validation studies, external quality assessment results (Instand e.V., May 2021, over 200 participating laboratories), and a comparative study of 86 patients with Lyme neuroborreliosis and 60 patients in a species-reactivity study (data prepared for publication).

Guideline Reference: The two-level antibody detection strategy is based on: Eldin C, Raffetin A, Bouiller K, et al. Review of European and American guidelines for the diagnosis of Lyme borreliosis. Médecine et Maladies Infectieuses. 2019;49(2):121-132. doi:10.1016/j.medmal.2018.11.011

Note: This patient-friendly article is based on peer-reviewed research and manufacturer validation data. It is provided for educational purposes and does not replace professional medical advice. Always consult a qualified healthcare provider for diagnosis and treatment decisions.